01/

如何测定肽纯度

02/

不同标准下肽纯度的应用

低纯度（>50%）：该水平适用于先导化合物的高通量筛选。如果您正在研究免疫应答，除去特定的污染物，>70%可以用于抗原制备。

中等纯度（>70%）：该水平足以生产、纯化和测试免疫测定中使用的抗体、进行酶底物研究、表位作图、亲和纯化、生物测定或其他免疫学应用以及肽筛选。生物化学和半定量应用可能需要达到>85%的纯度。例如酶学、表位作图或研究生物活性、酶-底物相互作用、磷酸化作用和蛋白质印记或细胞黏附中的肽封闭等。

高浓度（>90%）：该水平适用于定量生物测定、定量体外受体-配体相互作用研究、配体结合的生物活性研究、定量阻断和竞争性抑制试验、定量磷酸化和蛋白水解研究、电泳标记和色谱标准分析。

极高纯度（>98%）：该纯度适用于肽作为药物进行体内研究、临床试验、药物测试以及结构活性关系研究。

03/

优化合成以达到所需浓度

序列分析：例如使用软件在合成之前进行合成预测，以确定在整个合成过程中是否存在合成难度很大的区域。

副反应风险评估：例如外消旋化。有许多策略可以降低副反应的风险或有助于提高单个偶联反应的效率，包括伪脯氨酸、二肽构建块、添加剂以及替代侧链保护。

树脂选择：SPPS通常在与1%二乙烯基苯（DVB）交联的聚苯乙烯上进行。替代品包括聚乙二醇（PEG）衍生物，树脂的选择会影响合成成功率和粗品的纯度。连接到柱上的连接物提供生长肽和固相载体之间的可逆连接，并确定最终产物的性质和可使用的化学性质。接头的选择决定了最终产物中的C端官能团。

 偶联化学：选择通常取决于合成速度，较快的合成需要比较慢的合成（DIC、HBTU）更高反应性（=不稳定）的偶联试剂（HCTU、HATU和COMU）。反应温度会影响偶联化学的选择。

反应温度：提高温度可能会加快合成并提高纯度，但并不总是如此。需要注意的是，基于微波的加热只是加热，微波本身对合成没有特殊影响。

监控脱保护：能够通过实时紫外监测来监控，例如脱保护步骤的效率对于优化是非常重要的。

 双重耦合：预测软件确定的困难耦合可以通过双重耦合、延长耦合时间或添加更多等效物来处理。

空间位阻：偶联试剂必须足够快速，以便可以引入空间位阻氨基酸。

封端：这样做是为了在偶联反应后永久阻断任何未反应的氨基，或使完整肽的N-末端乙酰化。它对于在合成困难或长肽期间最小化缺失产物和辅助纯化过程是有很用的。

溶剂使用：始终使用新鲜溶剂。重复使用溶剂会降低纯度。

04/

选择一种能够快速合成高纯度肽的多肽合雷火体育